傳染性法氏囊病是由雙RNA病毒科的禽雙RNA病毒屬的傳染性法氏囊病毒（IBDV）引起的一種高度傳染性的疾病，呈急性并伴有嚴(yán)重免疫抑制，主要影響青年雞，造成重大的經(jīng)濟影響。該病于1957年首次爆發(fā)，1962年美國正式報告。早期該病的特點是廣泛性的腎臟損傷，當(dāng)時被稱為禽腎病。該病造成的巨大經(jīng)濟損失來源于兩個因素，它通過破壞法氏囊中含有IgM的發(fā)育中的B淋巴細(xì)胞，造成嚴(yán)重的免疫抑制，降低體液免疫應(yīng)答能力，使雞只更易受到感染，并易導(dǎo)致疫苗接種失敗；3周齡或青年雞，出現(xiàn)60%以上的死亡率。該病潛伏期短，約3-5天，小于3周齡的雞沒有臨床癥狀，但導(dǎo)致免疫抑制。IBDV導(dǎo)致的免疫抑制程度，取決于感染雞的年齡，2周齡的雞比大日齡的雞免疫抑制更嚴(yán)重。

一、基因組結(jié)構(gòu)和病原學(xué)

傳染性法氏囊病毒的基因組為分段的雙鏈RNA（dsRNA），片段分為A和B，病毒粒子55-60nm，無囊膜，二十面體對稱衣殼。B片段較小，編碼病毒蛋白1（VP1，95kDa）。A片段（2.9kb-3.4kb）具有兩個部分重疊的開放閱讀框（ORF）。其中，較小的ORF編碼非結(jié)構(gòu)蛋白VP5（17kDa），該蛋白與病毒的致病性和病毒在細(xì)胞間傳播有關(guān)；較大的ORF編碼一個110kDa的多聚蛋白，通過自裂解產(chǎn)生3個多肽：pVP2（48kDa）、VP3（32kDa）、VP4（28kDa）。VP4作為一種具有絲氨酸-賴氨酸蛋白酶活性的蛋白，介導(dǎo)了這一過程。

VP1蛋白是RNA依賴的RNA聚合酶，在病毒粒子中以游離的形式存在，并且該基因組連接蛋白（VPg）附著在兩個基因組片段的正鏈的5’端。研究表明，超強毒vvIBDV致病型的VP1基因序列形成了一個獨特的簇，表明它可能來自于B片段的基因重組。VP1蛋白由于其在病毒復(fù)制效率中的作用而調(diào)節(jié)病毒毒力，通過針對VP1蛋白的RNA（DNA載體為基礎(chǔ)）體外干擾實驗來抑制病毒復(fù)制。

外衣殼蛋白VP2是主要結(jié)構(gòu)蛋白，約占病毒總蛋白的51%（Heetal, 2009）。它至少有2個中和表位，可誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體。它負(fù)責(zé)抗原變異、適應(yīng)組織能力和病毒毒力。VP2成熟過程中的2種短肽產(chǎn)物在病毒附著和胞漿內(nèi)易位期間，決定病毒顆粒在細(xì)胞質(zhì)膜的組裝和破壞過程。蛋白質(zhì)被折疊成三個關(guān)鍵的結(jié)構(gòu)域：基底、外殼和突起。VP2并不是超強毒中唯一的毒力決定因素，VP1蛋白是另一個毒力決定因素（Qi等，2013）。

內(nèi)衣殼蛋白VP3（32kDa）是Y型三聚體，約占病毒總蛋白的40%，形成病毒蛋白組裝的衣殼內(nèi)部支架。它具有群特異性和少量的中和抗原表位，與VP1相互作用，通過其羧基末端結(jié)構(gòu)域與病毒基因組物質(zhì)相互作用。有學(xué)者認(rèn)為，VP3蛋白通過與病毒顆粒的幾乎所有成分（自身、VP2、VP1和兩個基因組dsRNA）的相互作用，促進病毒復(fù)制和子代病毒的產(chǎn)生。

VP4（28kDa）是一種病毒自催化蛋白酶，是一種可溶性蛋白，它利用不含ATP酶結(jié)構(gòu)域的絲氨酸-賴氨酸催化二元體，將多聚蛋白裂解為單獨的VP2、VP3和VP4蛋白。VP4在IBDV血清型和毒株中是保守的。該蛋白通過在組裝過程中不斷修飾C端末梢?guī)讉€小肽，在pVP2蛋白的成熟過程中發(fā)揮重要作用。

病毒非結(jié)構(gòu)蛋白VP5是一種II類膜蛋白，具有細(xì)胞質(zhì)N端和細(xì)胞外C端結(jié)構(gòu)域。它在所有的IBDV血清1型株中具有強堿性和半保守性，并富含半胱氨酸。VP5可誘導(dǎo)法氏囊病變，在病毒傳播和釋放中發(fā)揮重要作用。該蛋白在細(xì)胞膜內(nèi)積累，導(dǎo)致細(xì)胞活力下降。在體外培養(yǎng)中，VP2與VP5可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

二、抗原漂移和基因組RNA突變

外衣殼蛋白VP2可誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體。VP2上抗原表位所在的區(qū)域具有高核苷酸變異性，表明其易受抗原轉(zhuǎn)換和漂移的影響。研究表明，超強毒vvIBDV的毒力、組織嗜性和致病表型的決定因素是由VP2蛋白中253、279、284位的一些氨基酸殘基控制的。反向遺傳學(xué)研究數(shù)據(jù)表明，VP2高變區(qū)內(nèi)253位氨基酸或任何其他氨基酸的單一突變足以改變IBDV的毒力。在從接種了經(jīng)典株疫苗的雞群中分離出來的vvIBDV中，觀察到G254D的甘氨酸-絲氨酸突變，因此該突變可能導(dǎo)致疫苗接種失敗。流行病學(xué)發(fā)現(xiàn)一個全新的獨特株，其在VP2高變區(qū)具有獨特的AA序列272T、289P及在VP1中234P位，這些序列是保守的，根據(jù)分子特征和致病性，將其稱為新型IBDV（dIBDV），廣泛分布在南美、歐洲、亞洲。

基于IBDV VP2分子流行病學(xué)的遺傳多樣性，學(xué)者建議采用新的分類法，將其分為7個基因型。一些基因型具有全球分布性，如基因1型（caIBDV）和基因3型（vvIBDV及其重組株）的成員，而基因2型（美洲發(fā)現(xiàn)的vaIBDV）、基因4型（南美洲發(fā)現(xiàn)的dIBDV）和基因5型（墨西哥發(fā)現(xiàn)，被認(rèn)為是caIBDV和vaIBDV的重組株）的成員呈區(qū)域性分布。基因6型來自中東（沙特），與意大利的ITA基因型有92-93%的相關(guān)性，與俄羅斯的IBDV RF-5/94株有94-95%的相關(guān)性。基因7型的成員主要來自澳大利亞和少數(shù)俄羅斯。

三、血清型和致病型

IBDV在抗原上分為血清1型和血清2型。血清2型主要感染火雞，對雞無毒力，對血清1型也不能提供交叉保護。血清1型對雞具有不同致病性，這源于毒力、免疫抑制和抗原性的不同。早期的IBDV疫情主要是經(jīng)典株（caIBDV）引起的，法氏囊炎癥、腫大，然后萎縮。20世紀(jì)80年代初，在美國、中美洲和澳大利亞出現(xiàn)變異株（vaIBDV），它在抗原上不同于經(jīng)典株或超強毒株，只引起法氏囊萎縮，沒有炎癥。80年代末，西歐、東南亞和非洲出現(xiàn)的超強毒株（vvIBDV），特征是法氏囊腫大，然后萎縮，其毒力比經(jīng)典株更強，死亡率超過70%。經(jīng)典株和超強毒株會引起出血性炎癥，并伴有嚴(yán)重的法氏囊濾泡損耗，兩者僅在死亡率上有所不同（caIBDV為30-60%，vvIBDV為70-100%）。而變異株導(dǎo)致法氏囊快速萎縮，沒有炎癥、出血，死亡率10%以下或沒有。接種過caIBDV疫苗的雞群，仍然會感染變異株。變異株和超強株，以及最近新型IBDV（dIBDV）可以突破母源抗體，并感染青年雞，蛋雛雞死亡率高達60%，肉仔雞死亡率達25%。超強株雖然與經(jīng)典株具有抗原相似性，但是經(jīng)典株母源抗體很高的雞群，仍然會感染超強毒株。

法氏囊出血

法氏囊腫大

目前，IBD疫苗主要是滅活苗或活疫苗。種雞接種了滅活苗或減毒活疫苗，雛雞通過母源抗體就獲得對IBD的保護。然而，母源抗體會干擾減毒活疫苗的有效性，除非使用中等毒力疫苗和強毒疫苗，這樣會造成疫苗引起的法氏囊損傷，導(dǎo)致免疫抑制。因此，迫切需要開發(fā)安全有效的疫苗，甚至在母源抗體存在的情況下，也能誘導(dǎo)正確的免疫應(yīng)答。

四、先天免疫應(yīng)答

實驗發(fā)現(xiàn)，使用變異株開發(fā)的減毒活疫苗和滅活疫苗，都對感染經(jīng)典株或變異株的雞具有交叉保護作用；而使用經(jīng)典IBDV株開發(fā)的疫苗部分保護或不能保護變異株的感染。

基因表達研究表明，急性感染IBDV，激活了法氏囊T細(xì)胞和脾臟巨噬細(xì)胞。法氏囊細(xì)胞被耗盡，與NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞激活相關(guān)的基因上調(diào)，這些基因包括干擾素、白介素和MIP-1，以及調(diào)節(jié)先天免疫系統(tǒng)的基因，如MD-1、MD-2、補體、熱休克蛋白，以及炎性和促炎反應(yīng)基因。

IBDV感染過程中先天免疫應(yīng)答的遺傳調(diào)控

IBDV經(jīng)口感染后的8-12小時，可在腸道的單核巨噬細(xì)胞中檢測到，然后這些細(xì)胞將病毒轉(zhuǎn)運到法氏囊，在帶IgM的B細(xì)胞內(nèi)進行有效的病毒復(fù)制。感染激活NF-kB通路和其他細(xì)胞內(nèi)信號通路。巨噬細(xì)胞大量浸潤法氏囊可誘導(dǎo)促炎介質(zhì)如白介素的大量表達。在IBDV的研究中，觀察到中樞淋巴器官中IFN、趨化因子、補體成分、防御素的高表達。實驗研究發(fā)現(xiàn)，NK細(xì)胞可能參與了IBDV的感染發(fā)病和先天免疫應(yīng)答。

李小慶

2023.03.08